Macklyn Arbuckle urodził się 9 lipca 1866 roku w San Antonio w stanie Teksas w Stanach Zjednoczonych.
Karierę artystyczną rozpoczął na scenie teatralnej, gdzie osiągnął znaczącą pozycję jako aktor Broadwayu jeszcze przed pojawieniem się kina jako dominującego medium. Zasłynął rolą w sztuce „The County Chairman”, która przyniosła mu dużą popularność i została później przeniesiona na ekran. Jego sceniczny wizerunek opierał się na wyrazistej prezencji oraz umiejętności łączenia autorytetu z elementami humorystycznymi, co przełożyło się na charakter ról, które odgrywał również w filmie.
Do przemysłu filmowego trafił w drugiej dekadzie XX wieku i szybko stał się jednym z rozpoznawalnych aktorów charakterystycznych epoki kina niemego. Specjalizował się w rolach postaci o silnej pozycji społecznej – polityków, sędziów oraz wpływowych mieszkańców prowincji, często przedstawianych w sposób łączący powagę z akcentami komediowymi. Wystąpił m.in. w filmach „The County Chairman” (1914) oraz „It’s No Laughing Matter” (1915), które należą do najważniejszych produkcji jego dorobku filmowego.
W 1914 roku założył własną wytwórnię Macklyn Arbuckle Photoplay Company, co świadczyło o jego ambicjach wykraczających poza działalność aktorską. Jego kariera filmowa rozwijała się głównie w drugiej dekadzie i na początku lat 20. XX wieku, jednak zakończyła się przed przełomem dźwiękowym – jednym z jego późniejszych występów był udział w filmie „Janice Meredith” (1924). Po wycofaniu się z kina powrócił do działalności teatralnej oraz prowadził życie poza przemysłem filmowym.
W życiu prywatnym był związany z aktorką Elizabeth Tyree, z którą pozostawał w małżeństwie. Był również bratem aktora Andrew Arbuckle’a oraz kuzynem Roscoe „Fatty’ego” Arbuckle’a, jednej z najbardziej rozpoznawalnych postaci wczesnego Hollywood.
Macklyn Arbuckle zmarł 1 kwietnia 1931 roku w swojej posiadłości „Pine-Aire” w Waddington w stanie Nowy Jork w Stanach Zjednoczonych na skutek krwotoku mózgowego. Został pochowany na cmentarzu Brookside Cemetery w Waddington.
Pozostaje jedną z ważnych postaci przejścia od teatru do kina w początkowym okresie rozwoju amerykańskiej kinematografii, a jego działalność – zarówno sceniczna, jak i filmowa – ukazuje rolę aktorów teatralnych w kształtowaniu pierwszych dekad przemysłu filmowego.