Gladys Hulette urodziła się 21 lipca 1896 roku w Arcade w stanie Nowy Jork jako córka Williama i Annie Hulette. Jej matka była śpiewaczką operową, co miało duży wpływ na wczesny rozwój artystyczny córki. Gladys już jako kilkuletnie dziecko pojawiała się na scenie teatralnej, a aktorstwo bardzo wcześnie stało się jej wyuczonym i praktykowanym zawodem. Występowała na scenach teatralnych jeszcze jako dziecko, zdobywając doświadczenie sceniczne, które wkrótce otworzyło jej drogę do filmu. Jednym z najważniejszych momentów jej młodzieńczej kariery była rola Mytyl w premierowej broadwayowskiej produkcji „The Blue Bird” Maurice’a Maeterlincka z 1910 roku. Równocześnie zaczęła pojawiać się w bardzo wczesnych produkcjach filmowych, należąc do pionierów amerykańskiej kinematografii. Pierwsze doświadczenia zdobywała w wytwórni Vitagraph Studios już około 1908 roku, a następnie związała się z Edison Studios, należącą do Thomasa Edisona. W krótkich produkcjach tej firmy stała się jedną z pierwszych rozpoznawalnych aktorek kontraktowych wczesnego kina. W latach 10. i na początku lat 20. była regularnie obsadzana w dramatach i filmach przygodowych. Wystąpiła m.in. w serialu „The Exploits of Elaine” w reżyserii Louisa J. Gasniera i George’a B. Seitza, w filmie „Prudence the Pirate” w reżyserii Williama Parke’a oraz w dramacie „Tol’able David” w reżyserii Henry’ego Kinga. Istotnym etapem jej kariery był także film „Over the Hill to the Poorhouse” z 1920 roku, który okazał się wielkim sukcesem finansowym i znacząco wzmocnił jej pozycję w amerykańskim kinie początku lat 20. W 1917 roku została wybrana najpopularniejszą aktorką przez studentów New York University. Wraz z końcem epoki kina niemego jej aktywność filmowa zaczęła stopniowo maleć. W latach 30. pojawiała się jeszcze sporadycznie na ekranie, głównie w niewielkich rolach. Ostatnie występy miały miejsce w 1934 roku w filmach „The Girl from Missouri” w reżyserii Jacka Conwaya oraz „One Exciting Adventure”. W życiu prywatnym w 1917 roku poślubiła aktora Williama Parke’a Jr., syna reżysera Williama Parke’a. Małżeństwo zakończyło się rozwodem w 1924 roku. Jej brat, Frank Hulette, również przez krótki czas próbował swoich sił w aktorstwie, jednak to Gladys stała się najbardziej znaną artystką w rodzinie. Po zakończeniu kariery filmowej zajmowała się malarstwem, a przez pewien czas pracowała także jako sprzedawczyni biletów w Radio City Music Hall w Nowym Jorku. W późniejszych latach życia mieszkała w Kalifornii. Gladys Hulette zmarła 8 sierpnia 1991 roku w Montebello w Kalifornii w wieku 95 lat. Została pochowana na Rose Hills Memorial Park w Whittier w Kalifornii, w Columbarium of Seasons. Pozostaje jedną z wczesnych pionierek amerykańskiej kinematografii – aktorką, która rozpoczęła karierę jeszcze w pierwszych latach istnienia filmu i była świadkiem niemal całej historii kina XX wieku.